背景介绍:
XTT(二甲氧唑黄)是一种类似于 MTT 的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,活细菌中存在与辅酶II相关的脱氢酶,可将黄色的XTT还原成水溶性的橘黄色的甲臜。生成的甲臜能够溶解在组织培养基中,不形成颗粒,可直接用酶标仪检测定450nm 波长吸光值。
用XTT染色来评价药物对生物膜的影响可以评估药物在抗菌和抗生物膜方面的效果。通过测量细胞活力,可以确定药物对细胞的毒性和细胞膜的稳定性。
常规实验流程:
1. 96 孔板加入细菌 100μL/孔(约 1×104),置 37°C 5%CO2 细菌培养箱培养 24 小时。
2. 待形成成熟生物膜后,弃菌液并漂洗浮游菌体,再加入100ul培养基
3. 向培养基中加入适当浓度的受试化合物。
4. 将 96 孔板在培养箱中孵育适当时间。
5. 弃菌液并漂洗浮游菌体。
6. 向各孔中加入20ul的 XTT 工作液和80ul培养基。
5. 37°C下孵育 1~4 小时。
6. 酶标仪在 450nm 波长处检测每孔的光密度。
7.计算细菌存活率。
图片展示:
应用说明:
测定药物IC50浓度,确定药物对细胞的毒性和细胞膜的稳定性等。
参考文献:
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