背景介绍:
最低抑菌浓度(MIC)是指药物能抑制微生物生长的最低浓度,最低杀菌浓度(MBC)是指药物能杀死微生物的最低浓度。MIC和MBC都可用来评价药物抑菌或者杀菌作用的强弱,数值越小,药物的作用越强。
一般采用液体培养基稀释法测定药物MIC和MBC,在一系列试管或者96孔板中,用液体培养基对药物进行稀释,使各管或者孔内的药物呈一系列递减的浓度,同时在每支管或者孔内加入一定量的试验菌。培养24~48h后,分光光度计测定各管或者各孔OD600数值,测定的OD值与未加菌液的阴性对照孔最接近的最低药物浓度即为MIC。进一步将未长菌的一组的培养液移种到新鲜的琼脂培养基平板上,菌落数量少于10Cfu的最小浓度即为MBC。
常规实验流程:
1、 配制测试药物母液
2、 划线活化培养测试菌株
3、 于液体培养基中扩大培养测试菌株,并进行适当稀释
4、 取无菌96孔培养板,接种稀释后的菌液,并于起始孔内加入合适体积的测试药物母液,随后在孔内进行测试药物的二倍梯度稀释,并设置药物对照孔和测试菌株对照孔(即培养基对照)
5、 培养适当时间后,于分光光度计测试600nm吸光值,同时肉眼观察菌体沉淀情况
6、 结果判读:MIC(minimum inhibitory concentration)最低抑菌浓度,在微生物鉴定的稀释法中以在试管内或小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为最低抑菌浓度。即OD值接近药物阴性对照组的最低药物浓度。
7、 选取1/2MIC浓度、MIC浓度、2×MIC浓度、4×MIC浓度、8×MIC等浓度孔,各吸取100ul菌液涂布至固体培养基平板中培养适当时间后,根据培养基平板上菌落数量情况判断MBC浓度
8、 结果判读:MBC(minimum bactericidal concentration)最低杀菌浓度,杀死99.9%(降低3个数量级)的供试微生物所需的最低药物浓度。即培养基平板上菌落数量低于10CFU的最低浓度即为最低杀菌浓度。
图片展示:
MIC测试
MBC测试
应用说明:
测定药物的最小抑菌浓度,评价药物的抗菌活性及抑菌能力。
参考文献:
1. Wiegand I , Kai H , Hancock R . Agar and broth dilution methods to determine the
minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances[J]. Nature Protocols.
2、Wang G , Hindler J F , Ward K W , et al. Increased vancomycin MICs for Staphylococcus aureus clinical isolates from a university hospital during a 5-year period.[J]. Journal of Clinical Microbiology, 2006, 44(11):3883-3886.