脆弱拟杆菌-代养 敲除株构建 转座子突变体文库构建服务

脆弱拟杆菌（Bacteroides fragilis）是一种革兰氏阴性细菌，属于拟杆菌属，是人体肠道微生物群落的重要组成部分，也存在于口腔和上呼吸道中。B.fragilis的非产肠毒素菌株被认为是有益细菌，是肠道菌群的重要组成部分，有利于维持肠道稳态。

（1）魏等人通过对小鼠灌胃B.fragilis菌株，发现B.fragilis可以上调肠道中的ROS，激活结肠中的TGF-β，显著上调重要的信号传导分子Smad3磷酸化。从而上调结肠中的Treg细胞和抗炎细胞因子的表达，缓解肠道炎症[1]。  

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（2）Donaldson等人通过对小鼠灌胃具有B.fragilis基因片段的B.vulgatus菌株文库，成功找到影响B.fragilis在动物中定植的关键基因，从而可以实现调整B.fragilis丰度影响动物肠道健康[2]。

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（3）雷等人均采用结合转移方式敲除B.fragilis的T6SS基因，获得T6SS缺陷性株，并对小鼠进行灌胃实验，证明了B. fragilis T6SS 显著改变肠道代谢组，并影响肠道紧密连接蛋白的表达，保护肠道屏障的完整性，减轻DSS诱导的肠炎[3]。Robitaille等也通过敲除NCTC9343的T6SS基因，证实B. fragilis在人体肠道稳态系统中具有关键作用[4]。

通过对小鼠直接灌胃野生型B.fragilis、具有B.fragilis基因片段的突变体文库菌株以及敲除B.fragilis关键基因敲除菌株，证实了B.fragilis的丰度影响动物的肠道稳态，并找到部分影响B.fragilis定植的关键基因和一定程度揭示了B.fragilis在肠道稳态中起作用的关键原因。

因此，开发一种具有高效的转化效率，多种抗性基因筛选标记并且可以稳定遗传的针对脆弱拟杆菌的遗传转化方式具有重要意义。为了克服以上困难，锐志魔方生物公司现开发出一套适用于多种脆弱拟杆菌（NCTC9343/ATCC25285、ATCC43860）标准株和部分分离株的基因编辑手段，已成功敲除多种B.fragilis的多个关键基因。

锐志魔方生物具有多年的拟杆菌培养及基因改造经验，可为用户提供以下实验定制服务：

（1） 联系方式15892769783（微信同号）

（2） 承接各类脆拟分离培养实验；

（3） 承接各类脆拟过表达株构建服务；

（4） 承接各类脆拟菌敲除株构建服务；

（5） 承接各类脆拟菌转座子突变体文库构建、筛选。

参考文献：

[1]魏芳, 范梦慧, 刘光臣, 顾馨月, 邢莹莹. 脆弱拟杆菌ATCC25285通过TGF-β/Smad3通路诱导Treg细胞分化缓解结肠炎[J]. 中国药科大学学报, 2023, 54 (02): 226-237.

< p>[2]Donaldson G P, Ladinsky M S, Yu K B, et al. Gut microbiota utilize immunoglobulin A for mucosal colonization[J]. Science, 2018, 360(6390): 795-800

[3]雷棋怡,徐杨,李鹏飞.脆弱拟杆菌六型分泌系统对肠道屏障的影响及机制探究[J/OL].生物技术通报,1-10[2024-03-29].https://doi.org/10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2023-0840.

[4]Robitaille S, Simmons E L, Verster A J, et al. Community composition and the environment modulate the population dynamics of type VI secretion in human gut bacteria[J]. Nature Ecology & Evolution, 2023, 7(12): 2092-2107.