微生物限度检查

微生物计数法系用于有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌计数，适用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合微生物限度标准（除另有规定外，不适用于活菌制剂）。检验需遵循取样量、结果判断等规定，试验环境需符合微生物限度检查要求，全过程严格无菌操作，防止再污染，且洁净区域等需定期监测。

若供试品有抗菌活性，需去除或中和；使用中和剂、灭活剂或表面活性剂时，需确认其有效性及对微生物无毒性，表面活性剂还需确认与中和剂等的相容性。

计数方法

包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（MPN 法）。MPN 法精确度较差，但适用于某些微生物污染量小的供试品。需根据供试品特性和微生物限度标准选择计数方法，确保检测样品量能判断结果，且方法适用性须经确认。

计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验 所用培养基需进行适用性检查，供试品的计数方法也需进行适用性试验，若检验程序或产品变化可能影响结果，需重新试验。 菌种及菌液制备：试验用菌株传代次数不超过 5 代，采用适宜方法保存。按规定培养菌株，制成相应浓度菌悬液，菌液保存有时间限制，黑曲霉孢子悬液可在验证过的贮存期内使用。 阴性对照：需进行阴性对照试验，确保无菌生长，若有菌生长需偏差调查。

计数方法适用性试验步骤 供试液制备：根据供试品类型（水溶性、水不溶性非油脂类、油脂类、膜剂、肠溶及结肠溶制剂、气雾剂、贴剂及贴膏剂等），采用相应稀释液和方法制成供试液，必要时调节 pH 或进一步稀释。 接种和稀释：按规定接种，所加菌液体积不超过供试液体积的 1%，优先选择最低稀释级供试液试验，还需设置试验组、供试品对照组和菌液对照组。 抗菌活性的去除或灭活：若试验组回收菌数不足，可通过增加稀释液或培养基体积、加中和剂或灭活剂、采用薄膜过滤法及联合使用这些方法消除抑菌活性。若无法消除，在不影响结果判断时，采用更高稀释级供试液试验。 微生物回收：对各试验菌逐一回收，可采用平皿法（倾注法、涂布法）、薄膜过滤法或 MPN 法，按相应操作和培养条件进行。 结果判断：平皿法或薄膜过滤法要求试验组与菌液对照组菌落数比值在 0.5-2 范围内；MPN 法要求试验组菌数在菌液对照组 95% 置信限内。若符合，采用该方法计数；若部分试验菌回收不达标，选择最接近要求的方法和条件检查。

供试品检查 检验量：一般随机抽取不少于 2 个最小包装供试品，混合后检验，不同类型供试品检验量有规定，贵重或微量包装等可酌减。 供试品检查方法：按确认的方法测定需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数，设置阴性对照。 平皿法：制备平板，按规定培养后计数，按菌数报告规则报告，注意菌落生长成片的平板不宜计数，同稀释级平板菌落数有差异限制。 薄膜过滤法：制备供试液后过滤、冲洗、培养，按规则报告菌数，每张滤膜菌落数不超过 100cfu。 MPN 法：接种供试液至培养基，培养后观察生长情况，从表中查最可能数。 结果判断 需氧菌总数和霉菌、酵母菌总数按相应培养基菌落数判定，若细菌影响霉菌等计数，可使用选择性培养基。各品种微生物限度标准有明确数值规定，供试品各项检查结果均符合规定则判合格，否则不合格。 稀释液、冲洗液及培养基参见相关通则。

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