微生物检定

本指导原则为药物原料、辅料、制药用水等中检出微生物的鉴定提供指导，鉴定结果有争议时，以《伯杰氏系统细菌学手册》现行版结果为准。

微生物鉴定是借助分类系统，通过测定未知微生物特征，确定其大类、属、种及菌株水平的过程，是药品微生物检验的重要环节，药典相关章节对检出微生物的鉴定有明确规定，药品生产中有时也需对相关环节检出的微生物进行适当鉴定。 鉴定水平视情况而定，包括种、属鉴定和菌株分型。多数非无菌药品生产过程及部分无菌生产环境的风险评估，分析微生物常规特征即可；非无菌产品控制菌检查需达到药典规定水平；无菌试验阳性、培养基灌装失败等情况，鉴定至少达种水平，必要时到菌株水平。 

微生物鉴定程序

待检菌的分离纯化：通过连续划线等方法获取纯培养物，使受损微生物转为稳定状态，保证鉴定准确性。 初筛试验：通过形态观察、染色镜检、生化反应（如氧化酶、过氧化氢酶、凝固酶试验）确定微生物基本特征，是关键步骤，结果错误会影响后续试验。 表型微生物鉴定：依据表型特征（如菌落形态、理化特征等）鉴别微生物，易受培养条件等影响，广泛应用于药品微生物实验室。 基因型微生物鉴定：基于核酸序列等遗传物质分析，不受生长条件影响，更可靠，常用于无菌检查阳性、环境监控异常等情况的微生物调查，可通过 DNA 杂交、测序等方法实现。

 微生物鉴定方法的确认

可通过多种方法进行确认试验，所用菌株需包括适宜质控菌株。需评估鉴定结果及一致性水平，合适系统的一致性水平通常大于 90%，同时确认方法需涵盖准确度、专属性等内容。 

系统发育的相关内容

《伯杰氏系统细菌学手册》（第二版）以 16S rRNA 核苷酸序列分析为框架，系统发育树可显示微生物遗传关系，基因型与表型鉴定结果可能存在差异，多相分类学结合多种信息进行分类鉴定。 

溯源分析

通过比对污染微生物与相关环节监控微生物的同源性，确认污染来源。菌株水平鉴定在污染调查中重要，污染调查以基因型鉴定为主、表型为辅。多种基因型鉴定方法可用于同源性分析，全基因组测序是发展趋势，必要时联用多种方法。实际工作中，无菌试验阳性微生物经溯源确认为试验污染，可判试验无效，否则产品不合格；鉴定环境微生物有助于污染调查，确证同种相同株需比对更多基因序列，部分还需结合表型特征。 

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