真菌沉默株构建
当目标真菌缺乏高效的 CRISPR/Cas9 体系、同源重组效率极低，或靶基因为生长必需基因无法直接敲除时，RNAi 基因沉默是理想替代方案。锐志魔方利用根癌农杆菌介导转化（ATMT）结合双向启动子载体，构建可稳定遗传的真菌沉默株。
一、RNAi 沉默的适用场景
- 目标菌株同源重组效率低，CRISPR 体系难以建立；
- 靶基因为必需基因，完全敲除致死；
- 需要可调控、可恢复的表达下调，用于功能剂量研究；
- 多基因家族成员冗余，需同时下调多个同源基因。
二、典型构建流程
三、可承接真菌类群
| 分类 | 可承接真菌 |
|---|---|
| 酵母型真菌 | 毕赤酵母、酿酒酵母、白念珠菌、隐球菌、阿萨希毛孢子菌、马尔尼菲蓝状菌 |
| 丝状真菌 | 曲霉属、青霉属、镰刀菌、植物炭疽菌 |
| 大型真菌 | 香菇、双孢蘑菇、金针菇等 |
| 其他 | 具体可咨询定制 |
四、交付标准
- qPCR 检测目标基因表达量下降 ≥70%；
- 表型验证（如适用）；
- 阳性克隆甘油菌与实验报告。
五、参考文献
- Chao-Jun M A, Gang-Zheng W, Sha-Sha Z, et al. Functional analyses of anthranilate synthase gene LetrpE in Lentinula edodes by RNAi mediated gene knockdown. Mycosystema, 2018.
- Sun X, Wu H, Zhao G, et al. Morphological regulation of Aspergillus niger to improve citric acid production by chsC gene silencing. Bioprocess and Biosystems Engineering, 2018, 41: 1029-1038.
- 张芙蓉. 犬小孢子菌丝氨酸水解酶 FSH1 的功能及亚细胞定位研究. 大连医科大学, 2023.
- 梁涛. RNA 干扰曲霉菌 ALP、PLB 基因表达治疗真菌性角膜炎的实验研究. 青岛大学, 2010.