支原体转座子突变体文库构建

支原体基因组小、遗传工具稀缺，转座子随机插入突变体库几乎是获得功能缺失表型、挖掘致病与代谢基因的唯一高通量手段。锐志魔方基于 Tn4001 转座子体系，提供肺炎支原体、牛支原体等物种的高质量突变体文库构建与插入位点鉴定服务。

一、转座子插入突变原理

转座子破坏编码基因示意
图 1　转座子随机插入宿主基因组编码区，造成目标基因失活，形成独立的基因功能缺失突变体。

二、支原体突变体库的特殊价值

  • 支原体无法直接构建目标基因缺失突变株，转座子插入失活是获得“类敲除”表型的主要途径；
  • 从全基因组覆盖的突变体库中筛选目标表型，可一次性定位多个相关基因；
  • 结合 cubes-seq 技术，可快速鉴定转座子插入侧翼序列，明确失活基因。

三、技术优势

  • 自主改进了多类转座子工具质粒（Himar1 / Tn5 / Tn4351 等）；
  • 自有 cubes-seq 技术快速鉴定转座片段整合位点；
  • 严格的质控标准，确保突变株整合位点的均一性；
  • 可实现 Tn-seq 高通量测序，为文库鉴定提供数据支撑。

四、参考文献

  • Zhu X, Baranowski E, Dong Y, et al. An emerging role for cyclic dinucleotide phosphodiesterase and nanoRNase activities in Mycoplasma bovis. PLoS Pathogens, 2020, 16(6): e1008661.
  • Yamamoto T, Kida Y, Sakamoto Y, et al. Mpn491, a secreted nuclease of Mycoplasma pneumoniae, plays a critical role in evading killing by neutrophil extracellular traps. Cellular Microbiology, 2016, 19(3).
  • Shaw D, Miravet-Verde S, Pinero C, et al. LoxTnSeq: Random Transposon insertions combined with cre/lox recombination and counterselection to generate large random genome reductions. Cold Spring Harbor Laboratory, 2020.
  • Blötz C, Singh N, Dumke R, et al. Characterization of an immunoglobulin binding protein (IbpM) from Mycoplasma pneumoniae. Frontiers in Microbiology, 2020, 11: 685.
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