丝状真菌多物种定点编辑项目制交付

项目背景

客户需要对多种丝状真菌底盘进行定向遗传改造，用于酶制剂产量提升与代谢通路解析。项目要求交付可重复、可传代的稳定编辑株，并配套完整的筛选与验证方案，以便后续中试放大。

目标菌株

• 黑曲霉 Aspergillus niger — 蛋白分泌能力强，适用于酶制剂高产改造
• 米曲霉 A. oryzae — 传统发酵底盘，食品级表达宿主
• 里氏木霉 Trichoderma reesei — 纤维素酶系研究与工业酶生产
• 产黄青霉 Penicillium chrysogenum 等青霉属菌株
• 蛹虫草 Cordyceps militaris — 药用真菌活性产物研究

编辑策略

针对不同菌株的细胞壁特性与转化效率差异，灵活选用原生质体 PEG 介导转化或农杆菌介导转化（ATMT）。以 CRISPR/Cas9 体系为核心，结合同源重组修复（HDR）实现：

• 单基因或多基因定点敲除（knock-out）
• 过表达 / 启动子替换
• 标签融合与分泌信号肽优化（如 glaA 信号肽）
• 多基因组合编辑与通路重构

同步针对难转化菌株开展内源复制子挖掘、筛选标记适配与抗性背景测试，确保编辑骨架在目标菌株中可用。

交付成果

• 获得各菌株稳定遗传的定点编辑株，编辑事件经 Sanger 测序与 Southern / 荧光验证
• 提供从载体设计、转化、筛选到鉴定的完整 SOP
• 传代稳定性经多轮复检确认，满足后续实验与放大需求

案例图片